在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種：

1.復蘇不易成功2.細胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細胞生長緩慢，當你的細胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸，不妨試一試以下幾種解決辦法。

1、復蘇難以成功

原因：RAW264.7對空間十分敏感，復蘇密度太高，細胞增殖太快，加劇細胞營養(yǎng)缺失，加速細胞老化。

解決辦法：T75培養(yǎng)瓶復蘇細胞數(shù)量控制在104~105

2、細胞變異明顯

原因：細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促使該細胞呈現(xiàn)梭形、長梭形

解決辦法：改善細胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌，換flask培養(yǎng)瓶，采用一次性器具，使用質(zhì)量較高的胎牛血清

3、消化困難

原因：細胞老化后，細胞偽足多且長，使細胞難消化，使用胰酶或細胞刮會對細胞損傷較大

解決辦法：無需胰酶使用吸管重復吹打，可消化大部分正常狀態(tài)的細胞；但若細胞為“長腳"狀態(tài)，即使加入胰酶消化超過10min，也難以消化下來，勉強消化，對后續(xù)的實驗數(shù)據(jù)也有較大影響。

4、生長緩慢

原因：支原體污染會導致細胞生長緩慢，甚至難以貼壁

解決辦法：定期進行支原體檢測，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，即刻使用支原體去除試劑