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收集腫瘤細(xì)胞外泌體

外泌體的研究離不開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)。以腫瘤相關(guān)外泌體研究為例，目前，收集腫瘤細(xì)胞外泌體主要有兩種方法：方法一使用正常培液養(yǎng)細(xì)胞再換無(wú)血清培液收外泌體。方法二直接使用exosome-freeFBS配制培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細(xì)胞收外泌體。首先，就是基本的離心條件了，目前超離比較好的就是貝克曼或者日立的了，這兩家超離在行業(yè)內(nèi)算是翹楚了。其次就是離心參數(shù)了：120000g，4℃，離心14h，離心結(jié)果如圖：1：離心后，血清外泌體會(huì)富集在管底和管壁；2：吸取血清時(shí)，只吸取澄清部分的血清，并且遠(yuǎn)離上圖中標(biāo)...

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“外泌體”的常見(jiàn)問(wèn)題集錦~

如何鑒定提取出來(lái)的外泌體？以目前外泌體的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品，也沒(méi)有任何一個(gè)單一實(shí)驗(yàn)可以確定外泌體的存在。根據(jù)國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)發(fā)表的指導(dǎo)手冊(cè)《MISEV2018》，外泌體特征鑒定通過(guò)NTA測(cè)粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測(cè)標(biāo)志蛋白三項(xiàng)來(lái)驗(yàn)證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來(lái)觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征，WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白。外泌體如何保存？不同時(shí)間、溫度的保存對(duì)不同的外泌體樣本影響不一；如果研究方向?yàn)橥饷隗w形態(tài)特征...

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外泌體抗衰憑什么搶占“風(fēng)頭”？

外泌體抗衰憑什么搶占“風(fēng)頭”？據(jù)研究，在尿液、血清、唾液和母乳等體液中都檢測(cè)到了外泌體，可見(jiàn)其分布之廣。從作用原理上，外泌體通過(guò)胞吞、胞吐及膜融合的方式進(jìn)入細(xì)胞，將其活性物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、DNA、RNA等）釋放至宿主胞質(zhì)溶膠調(diào)控細(xì)胞生理功能；也可結(jié)合胞膜受體激活相關(guān)信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞功能，實(shí)現(xiàn)非細(xì)胞化再生醫(yī)美治療。另一方面，干細(xì)胞進(jìn)行抗衰是嚴(yán)肅的科學(xué)命題，并非簡(jiǎn)單的細(xì)胞回注就可達(dá)到效果，干細(xì)胞使用十分嚴(yán)格，醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展的干細(xì)胞臨床研究需由兩委局協(xié)同共管，批準(zhǔn)才能進(jìn)行的，臨床許可嚴(yán)...

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胎牛血清應(yīng)用廣泛，符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)是關(guān)鍵

胎牛血清應(yīng)用廣泛，符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)是關(guān)鍵以國(guó)內(nèi)滅活病毒疫苗的制造過(guò)程為例，主要是通過(guò)體外大規(guī)模培養(yǎng)特定的細(xì)胞株來(lái)繁殖病毒。目前，主流培養(yǎng)液仍然采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清的方式，強(qiáng)調(diào)了對(duì)有效培養(yǎng)方法和一致材料的迫切需求。正規(guī)來(lái)源的胎牛血清不會(huì)額外添加其他不明成分，除了含有細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)成分及輔助因子之外，還含有轉(zhuǎn)移和結(jié)合蛋白，有緩沖pH和解毒的作用，因而常用于疫苗生產(chǎn)細(xì)胞的培養(yǎng)。對(duì)于牛血清的應(yīng)用場(chǎng)景，目前國(guó)內(nèi)遵循的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2020版《中華人民共和國(guó)藥典》三部通則（3604新生牛血清檢測(cè)...

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胎牛血清有必要熱滅活嗎

—胎牛血清有必要熱滅活嗎—01目的血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min，然后將它們分裝儲(chǔ)存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)，以排除對(duì)免疫分析的影響。胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。研究人員曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相...

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血清的供應(yīng)量改變帶來(lái)的價(jià)格波動(dòng)

血清的供應(yīng)量改變帶來(lái)的價(jià)格波動(dòng)由于中國(guó)海關(guān)總署對(duì)供應(yīng)企業(yè)和允許進(jìn)口的血源地做出了明確規(guī)定，胎牛血清的價(jià)格便與這些血源產(chǎn)地的供應(yīng)量息息相關(guān)。胎牛血清是一種天然產(chǎn)物，產(chǎn)地牛源的健康狀況和生長(zhǎng)環(huán)境尤為重要，當(dāng)牛源產(chǎn)地氣候變化時(shí)，會(huì)極大的影響胎牛血清的產(chǎn)量。例如2018年澳洲地區(qū)發(fā)生干旱，導(dǎo)致農(nóng)場(chǎng)主不得不屠宰超量的牛以避免損失，這種情況間接導(dǎo)致當(dāng)年澳洲血源的胎牛血清供應(yīng)鏈同比往年有一個(gè)顯著的增長(zhǎng)。所以說(shuō)，跟一般的商品不同，胎牛血清的供應(yīng)量并非僅由胎牛血清的市場(chǎng)需求決定，而是由當(dāng)年的氣...

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一般在拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?

一般在拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?收到細(xì)胞后先不要開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議對(duì)收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張)，排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況一般可以再申請(qǐng)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培...

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血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？

血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？血清在解凍過(guò)程（包括沒(méi)有*解凍）或儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會(huì)聚集成團(tuán)，形成絮狀沉淀或外觀混濁；在運(yùn)輸過(guò)程中，由于時(shí)間較長(zhǎng)，所以往往有少許解凍，因此也可能稍有沉淀，但這些都不影響血清性能。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。

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